默克限制性?xún)?nèi)切酶圖譜又稱(chēng)DNA的物理圖譜，它由一系列位置確定的多種限制性?xún)?nèi)切酶酶切位點(diǎn)組成，以直線(xiàn)或環(huán)狀圖式表示。在DNA序列分析、基因組的功能圖譜繪制、DNA的無(wú)性繁殖、基因文庫(kù)的構(gòu)建等工作中，建立限制性?xún)?nèi)切酶圖譜都是*的環(huán)節(jié)
默克限制性?xún)?nèi)切酶能特異地結(jié)合于一段被稱(chēng)為限制性酶識(shí)別序列的DNA序列之內(nèi)或其附近的特異位點(diǎn)上，并切割雙鏈DNA。它可分為三類(lèi):Ⅰ類(lèi)和Ⅲ類(lèi)酶在同一蛋白質(zhì)分子中兼有切割和修飾(甲基化)作用且依賴(lài)于ATP的存在。
構(gòu)建DNA限制性?xún)?nèi)切酶圖譜有許多方法。通常結(jié)合使用多種限制性?xún)?nèi)切酶，通過(guò)綜合分析多種酶單切及不同組合的多種酶同時(shí)切所得到的限制性片段大小來(lái)確定各種酶的酶切位點(diǎn)及其相對(duì)位置。酶切圖譜的使用價(jià)值依賴(lài)于它的準(zhǔn)確性和準(zhǔn)確程度。
對(duì)質(zhì)粒DNA酶切反應(yīng)而言，限制性?xún)?nèi)切酶用量可按標(biāo)準(zhǔn)體系1μgDNA加1單位酶，消化1-2小時(shí)。但要*酶解則要增加酶的用量，一般增加2-3倍，甚至更多，反應(yīng)時(shí)間也要適當(dāng)延長(zhǎng)。
所用的酶量取決于DNA的純度、量和型態(tài)。限制性?xún)?nèi)切酶的活力單位定義為在適當(dāng)?shù)臏囟认?，?小時(shí)內(nèi)，1ugDNA在50ul體積中，被*消化所需的限制性?xún)?nèi)切酶的量。一般說(shuō)來(lái)，線(xiàn)性DNA比超螺旋DNA更易消化。
那么，如何保存限制性?xún)?nèi)切酶？不太常用的限制性?xún)?nèi)切酶多保存在-70oC，每周或每天用的酶保存在-20oC。有一些酶需要不同的保存條件。使用限制性?xún)?nèi)切酶時(shí)，應(yīng)將酶保存在冰上。
在線(xiàn)客服
電話(huà)咨詢(xún)
